| 阳性对照 Starer Kit >> Beta－Gal start试剂盒： |
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siRNA基因下调研究面临的第一个问题是如何选定有效的siRNA序会不遗余力的向您提供技术支持。 |
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| >> Beta－Gal start试剂盒 |
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| 目录号 |
试剂盒名称 |
试剂盒组成 |
目录号 |
供货量 |
| 10501 |
Beta-GALsiRNA Silencing Kit |
β-Gal siRNA-90 |
10304 |
0.5 nmol |
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β-Gal siRNA-80 |
10305 |
0.5 nmol |
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β-Gal siRNA-75 |
10306 |
0.5 nmol |
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阴性对照siRNA |
10402 |
0.5 nmol |
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β-Galactosidase质粒 |
94001 |
10 µg |
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1X Universal Buffer |
90101 |
1.0 ml |
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β-Galactosidase |
92001 |
1 Unit/µl, 10 µl |
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RNase-free Water |
90102 |
1.0 ml |
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1X Lysis Buffer |
90103 |
10 ml |
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1M Sodium Carbonate |
90104 |
10 ml |
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2x Assay Buffer |
90105 |
10 ml |
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| 该试剂盒含有LacZ报道基因质粒和四种不同siRNA。其中一种siRNA是阴性对照，另外三种siRNA能抑制LacZ，但是它们的抑制效率不同。如左图所示，将LacZ表达质粒与不同siRNA共转导入细胞株，孵育48小时后，测定细胞株中LacZ编码的beta-半乳糖苷酶的活性，即该酶将无色ONPG
(O-硝基苯基-?-D-吡喃半乳糖苷)
分解为半乳糖和黄色的硝酸苯酚。利用ELISA检测仪读取数据后，即可计算并绘制样品与对照的比值，由此即可证明针对LacZ的三种siRNA的抑制效率从0～90％不等。
该试剂盒在三种常用细胞株，即HeLa、NIH3T3和HEK293上进行过测试和验证。我们推荐转染试剂选用LipofectAMINE
2000TM(Invitrogen)。 |
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| >> Fig.1 24孔板操作示意图： |
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| >> Fig.2 直方图显示各siRNA的敲减效率不同： |
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| 各组扣减背景值并用空转质粒组进行校正后的beta-Gal活性值(细胞株为HEK293)。 |
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化学合成siRNA
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