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·对照RNAi质粒按照实验用途可以分为阳性对照和阴性对照RNAi质粒。阳性对照用于优化、监控RNAi质粒转染条件、监控细胞状态和RNAi机制是否正常工作,阴性对照组应该不会出现靶基因的敲减。
·对照RNAi质粒按照靶基因的来源可分为内源性和外源性对照RNAi质粒,例如绿色荧光蛋白(GFP)和萤火虫荧光素酶等报告基因的siRNA为外源性对照RNAi质粒,而GAPDH、beta-actin等基因的RNAi质粒属于内源性对照RNAi质粒。
·需要注意的是外源性对照RNAi质粒一般应与相应的外源性基因表达载体一起输入靶细胞或靶组织,同时还应设立一个阴性组即只转染外源性基因的载体和/或阴性对照RNAi质粒。
·与某些文献报道所用阴性对照siRNA设计方法不同,例如将靶基因siRNA序列错配或颠倒若干碱基位置,上海吉凯提供的普适型阴性对照RNAi质粒,适用于所有内源基因或报告基因。普适型阴性对照RNAi质粒(CMV)适用于转染真核细胞,可表达的siRNA的序列不会与任何内源基因或常见报告基因序列完全匹配。该质粒以新霉素抗性基因作为筛选标记,可用于构建稳定表达阴性对照shRNA的细胞株。该质粒用于转录shRNA的启动子是经改建的CMV启动子。 |