| 由于诸如以下原因，（1）目的细胞暂时不易得到，（2）目的细胞转染效率非常低（您可下载预实验信息表，上海吉凯为您提供目的细胞转染效率的检测），（3）目的细胞需诱导才能表达靶基因，（4）目前尚无靶基因的抗体，由于上述原因，研究者可以在非常容易转染的与待研究目的细胞或者组织是同物种的细胞株中进行“RNAi有效靶点筛选”工作。其理论依据是，在确保高效进入细胞的前提下，有效的RNAi打靶序列对于同物种、靶基因表达水平相近的不同细胞的靶基因抑制效率是相同的。 筛选步骤如下图(RNAi有效靶点快速筛选示意图)所示。如果您已经构建的全长靶基因真核表达载体不是融合型的，即不是与报告基因或标签多肽融合，但是您具有靶蛋白的抗体或者RT-PCR的检测引物，也可以采用下图所示的快速筛选路线。
目前有多种快速筛选RNAi有效靶点的检测手段，如GFP/RFP荧光检测，western blot检测, RT-PCR或SYBR
Green I染色的实时定量RT-PCR检测等。其理论依据为： RNAi是对靶基因mRNA进行降解，因此只要靶基因在mRNA水平得到最大限度的抑制，那么相应的靶基因在蛋白质水平也可以达到最大限度的敲减。同样目前也有多种优化RNAi实验条件的方法，如构建RNAi稳定表达细胞株，质粒加抗生素筛选或者采用病毒载体。上海吉凯推荐最为可靠的敲减证据是，同时检测靶基因mRNA和蛋白质水平的敲减效果。RNAi有效靶点快速筛选示意图 |
化学合成siRNA
